Белково-витаминно-минеральные и амидо-витаминно-минеральные добавки. Методы определения содержания ретинола-ацетата (витамина А), эргокальциферола (холекальциферола) (витамина D), токоферола-ацетата (витамина Е).
ГОСТ Р 52147-2003
Настоящий стандарт распространяется на белково-витаминно-минеральные и амидо-витаминно-минеральные добавки и устанавливает хроматографические методы определения ретинола-ацетата (витамина А), эргокальциферола (холекальциферола) (витамина D), токоферола-ацетата (витамина Е).
1. Определение содержания ретинола-ацетата (витамина А) и токоферола-ацетата (витамина Е) фотометрическим методом
Сущность метода заключается в омылении образца водно-спиртовым раствором гидроокиси калия, экстракции витаминов диэтиловым эфиром, разделении витаминов хроматографией на колонке с окисью алюминия и количественном определении витаминов фотометрическим методом.
2. Определение содержания ретинола-ацетата (витамина А), эргокальциферола (холекальциферола) (витамина D), токоферола-ацетата (витамина Е) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)
Сущность метода заключается в омылении образца водно-спиртовым раствором гидроокиси калия, экстракции витаминов диэтиловым эфиром с последующим определением витаминов на жидкостном хроматографе.
При содержании витамина D в испытуемом продукте менее 10 МЕ/г перед проведением высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) необходима очистка экстракта на колонке с окисью алюминия. Анализ проводят из отдельно взятой навески массой 10 г.
1. Определение содержания ретинола-ацетата (витамина А) и токоферола-ацетата (витамина Е) фотометрическим методом
Весы лабораторные высокого класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.
Спектрофотометр со спектральным диапазоном работы 186-1100 нм, основной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1%, градуировкой длин волн в ультрафиолетовой (УФ) области - не более 0,1 нм.
Фотоэлектроколориметр с пределом измерений оптической плотности от 0 до 2, основной погрешностью измерений не более 1% и светофильтром длиной волны λ=(520±25) нм.
Холодильник бытовой по ГОСТ 16317.
Баллон с азотом рабочим давлением от 40 до 60 кг/см2 (от 4 до 6 МПа).
Испаритель ротационный диапазоном измерения рабочего давления от 7 до 760 мм рт.ст. (от 9·102 до 10·104 Па) или насос водоструйный по ГОСТ 25336.
Баня водяная с регулятором нагрева.
Термометр жидкостный по ГОСТ 28498.
Печь муфельная электрическая, обеспечивающая поддержание температуры от 0 до 800 °С с погрешностью ±10 °С по ГОСТ 9736.
Секундомер.
Чашки выпарительные фарфоровые диаметром 123 мм по ГОСТ 9147.
Щипцы для тиглей муфельные.
Лампа ультрафиолетовая со светофильтрами λ=260-350 нм.
Шкаф сушильный, обеспечивающий поддержание температуры от 0 °С до 110 °С с погрешностью ±2 °С [3].
Холодильники стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336.
Колбы конические со шлифом Кн-1-100(250)-24/29 по ГОСТ 25336.
Колбы мерные 1(2)-50(100, 200)-2 по ГОСТ 1770.
Воронки делительные вместимостью 250, 500 см3 по ГОСТ 25336.
Цилиндры мерные 1(2, 2а, 3, 4, 4а)-25(100, 250)-2 по ГОСТ 1770.
Воронки для фильтрования ВФ-1-56(75)ХС по ГОСТ 25336.
Пипетки с одной отметкой 1-2-0,5(1,2) по ГОСТ 29169.
Пипетки градуированные 1(2, 3, 5)-1(1а, 2, 2а)-2-0,5(1, 2, 5) по ГОСТ 29227.
Пробирки мерные с притертыми пробками П-1(2)-5(10)-0,1(0,2)ХС по ГОСТ 1770.
Склянки из темного стекла.
Колбы с тубусом вместимостью 250 см3 по ГОСТ 25336.
Колбы круглодонные К-1-100(250)-14/23(19/26) по ГОСТ 25336.
Колонки стеклянные для хроматографии размером 10х200 мм.
Эксикатор по ГОСТ 25336, заправленный хлористым кальцием, прокаленным при температуре 250-300 °С в течение 2 ч.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026 или фильтры.
Вата обезжиренная, готовят по ГОСТ 4517.
Палочки деревянные.
Витамин Е фармакопейный.
Спирт этиловый абсолютированный или приготовленный по ГОСТ 4517.
Железо хлорное, раствор массовой долей около 0,2% в абсолютированном этиловом спирте.
Калия гидроокись по ГОСТ 24363, раствор массовой долей 50%.
Натрий сернокислый по ГОСТ 4166, безводный.
Алюминия окись, безводная.
Эфир петролейный, фракция (40-70) °С, не содержащая ненасыщенные и ароматические углеводороды.
Эфир диэтиловый фармакопейный, не содержащий пероксидные соединения (испытание на отсутствие пероксидных соединений - по ГОСТ 4517).
Пирогаллол или гидрохинон по ГОСТ 19627.
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652.
ο-Фенантролин или α,α'-дипиридил, раствор массовой долей около 0,5% в абсолютированном этиловом спирте.
Кислота аскорбиновая.
Фенолфталеин, спиртовый раствор массовой долей 1%.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
2. Определение содержания ретинола-ацетата (витамина А), эргокальциферола (холекальциферола) (витамина D), токоферола-ацетата (витамина Е) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)
Аппаратура, материалы и реактивы п.1 со следующим дополнением.
Хроматограф жидкостный с УФ-детектором со спектральным диапазоном 190-360 нм, обеспечивающий одновременное измерение на не менее 3 длинах волн с уровнем шумов не более 10-4 единиц оптической плотности (е.о.п.).
Колонка аналитическая хроматографическая для ВЭЖХ, размером 80 (64, 120)х2 мм, заполненная сорбентом Силасорб 600 (размер частиц 5 мкм) с эффективностью не ниже 5000 теоретических тарелок.
Прибор для перегонки при атмосферном давлении.
Ретинол-ацетат (витамин А) фармакопейный.
Эргокальциферол кристаллический (витамин D2) или холекальциферол кристаллический (витамин D3).
Спирт изопропиловый.
Гексан.
Алюминия окись для хроматографии.
2,6-Ди-трет-бутил-п-крезол (бутиолокситолуол).
