Молоко и кисломолочные продукты. Определение содержания афлатоксина М1 методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуориметрическим (спектрофлуориметрическим) детектированием.
ГОСТ 34049-2017
Настоящий стандарт устанавливает методику выполнения измерений массовой доли афлатоксина M1 в молоке и кисломолочных продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) с использованием жидкостного хроматографа с флуориметрическим (спектрофлуориметрическим) детектированием.
Допустимый уровень содержания афлатоксина M1 в молоке и кисломолочных продуктах составляет не более 0,0005 мг/кг в сырье, предназначенном для производства детского питания, и в готовых продуктах детского и диетического питания - менее 0,00002 мг/кг.
Диапазон измеряемых значений массовой доли афлатоксина M1 (масса навески пробы от 5 до 25 г в зависимости от вида продукции) составляет от 0,00002 до 0,0005 мг/кг.
Метод определения массовой доли афлатоксина M1 в молоке и кисломолочных продуктах основан на последовательном проведении следующих операций:
- экстракция афлатоксина M1 из образца;
- очистка экстракта методом ТФЭ с использованием концентрирующего патрона для подготовки проб методом ТФЭ;
- перевода афлатоксина M1 в интенсивно флуоресцирующее соединение обработкой трифторуксусной кислотой и определение массовой доли афлатоксина M1 в форме его производного методом обращенно-фазовой хроматографии с флуориметрическим детектированием.
Жидкостный хроматограф с флуориметрическим (спектрофлуориметрическим) детектором, обеспечивающим возбуждение флуоресценции в диапазоне длин волн (360±20) нм и регистрацию интенсивности флуоресценции в диапазоне длин волн от (430±20) нм. Применяемый детектор должен обеспечивать предел обнаружения афлатоксина M1 в подвижной фазе не менее 1 нг/см3.
Весы лабораторные общего назначения высокого или среднего класса точности с наибольшим пределом взвешивания 220 г и ценой деления 0,01 г по ГОСТ 24104.
Колбы мерные 2-25-2, 2-50-2, 2-100-2 по ГОСТ 1770.
Пипетки, градуированные 2-го класса точности вместимостью 1; 2; 5; 10 см3 по ГОСТ 29227.
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25; 50; 100; 1000 см3 по ГОСТ 1770.
Государственный стандартный образец (далее - ГСО) состава раствора афлатоксина M1 в ацетонитриле или смеси бензол-ацетонитрил 98:2 (массовая концентрация 1 мкг/см3, погрешность ±10%), например ГСО 7935-2001.
Хроматографическая колонка, заполненная обращенно-фазовым сорбентом С18, с предколонкой, заполненной тем же сорбентом, обеспечивающая число теоретических тарелок для пика афлатоксина M1 не менее 2000, например хроматографическая колонка длиной 150 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазовым сорбентом Кромасил С18 с зернением 5 мкм. Допускается использование колонок иных типоразмеров, заполненных аналогичными сорбентами, при условии, что они обеспечивают указанное выше число теоретических тарелок.
Устройство для измельчения пробы (микроизмельчитель тканей любого типа, лабораторная мельница или кофемолка).
Перемешивающее устройство с подогревом или водяная баня любого типа с регулятором температуры по действующим в государствах, принявших настоящий стандарт, нормативным документам.
Дозаторы пипеточные любой марки переменного тока вместимостью от 100 до 1000 мм3 с метрологическими характеристиками по ГОСТ 28311.
Колбы мерные 2-го класса точности вместимостью 25; 50; 100; 500 см3 по ГОСТ 1770.
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 10; 50; 500 см3 по ГОСТ 1770.
Пробирка для микропроб однократного применения, вместимость 1,5 см3.
Насос лабораторный вакуумный, мембранный или водоструйный по ГОСТ 25336, обеспечивающий разрежение от 20 мм рт.ст. до 75 мм рт.ст.
Центрифуга лабораторная любого типа, частота вращения не менее 5000 об/мин.
Пробирки для центрифугирования пластиковые вместимостью 30 см3.
Воронки делительные вместимостью 250 см3 по ГОСТ 25336.
Воронки химические диаметром 60 мм по ГОСТ 25336.
Колбы плоскодонные вместимостью 250 см3 по ГОСТ 25336.
Колбы остродонные для упаривания вместимостью 30 см3 по ГОСТ 25336.
Баня водяная с диапазоном от 30°С до 90°С, предел допускаемой погрешности не более ±1°С, погрешность стабилизации температуры в рабочей камере не более ±1°С.
Фильтры бумажные "красная лента", средняя скорость фильтрации 450 с (время по Херцбергу), пределы задержания от 2 мкм до 4 мкм, содержание золы 0,004% по действующим в государствах, принявших настоящий стандарт, нормативным документам.
Концентрирующие патроны для подготовки проб методом твердофазной экстракции (далее - ТФЭ), с содержанием силикагеля 1 см3 или 3 см3 по нормативным документам, действующим в государствах, принявших настоящий стандарт.
Шприцы медицинские вместимостью 20 см3 по ГОСТ 22967.
Часы по ГОСТ 27752.
Термометр по ГОСТ 29224.
Хлорамин, х.ч., массовая доля активного хлора 25%.
Гидроокись натрия, х.ч., по ГОСТ 4328.
Борная кислота, х.ч., по ГОСТ 9656.
Натрий углекислый кислый, ч.д.а., по ГОСТ 4201.
Натрий хлористый по ГОСТ 4328.
Хлороформ по ГОСТ 20015.
Лимонная кислота по ГОСТ 908;
Трифторуксусная кислота по нормативным документам, действующим на территории государств, принявших настоящий стандарт.
Ацетон по ГОСТ 2603.
Ацетонитрил чистый для анализа по нормативным документам, действующим на территории государств, принявших настоящий стандарт.
Изопропонол чистый по нормативным документам, действующим на территории государств, принявших настоящий стандарт.
Натрий безводный по ГОСТ 5644.
