Продукция пищевая. Определение цикламата методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
ГОСТ EN 12857-2015
Настоящий стандарт распространяется на пищевую продукцию и устанавливает метод определения цикламата с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
Метод основан на экстрагировании цикламата натрия из пробы водой, последующей химической конверсии цикламата в N,N-дихлорциклогексиламин и количественном определении N,N-дихлорциклогексиламина с помощью ВЭЖХ с применением хроматографической колонки с обращенно-фазовым сорбентом и спектрофотометрического детектирования при длине волны 314 нм.
Высокоэффективный жидкостный хроматограф, состоящий из насоса, устройства для инжектирования пробы, спектрофотометрического детектора, пригодного для измерения оптической плотности при длине волны 314 нм (предпочтителен диодно-матричный детектор), самописца или интегратора, позволяющего измерять высоту и площадь хроматографических пиков.
Аналитическая хроматографическая колонка, заполненная обращенно-фазовым сорбентом с неподвижной фазой RP С 18 размером частиц 5 мкм, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4 мм, снабженная защитной колонкой с обращенно-фазовым сорбентом RP С 18 размером частиц 5 мкм (применение защитной колонки рекомендуется при испытании любых проб твердой консистенции). Критерием пригодности хроматографической колонки для данного вида анализа является разделение пиков анализируемого вещества и соседних пиков компонентов матрицы пробы на уровне базовой линии.
Баня ультразвуковая.
Фильтры мембранные с размером пор не более 0,45 мкм.
Устройство для фильтрования, снабженное держателем мембранных фильтров и пригодное для фильтрации и дегазирования подвижной фазы и раствора для кондиционирования (промывки) колонки.
Гомогенизатор.
Баня водяная, пригодная для поддержания температуры 60°С.
Лабораторная центрифуга, обеспечивающая центробежное ускорение в основании центрифужных пробирок (5.8) не менее 1400g.
Стеклянные центрифужные пробирки вместимостью 50 см3, снабженные пробками.
Делительные воронки вместимостью 50, 100 см3.
Фильтровальная бумага, обеспечивающая среднюю скорость фильтрации.
Фильтры для разделения фаз (на усмотрение пользователей настоящего стандарта).
Метиловый спирт (метанол) для ВЭЖХ.
н-Гептан для ВЭЖХ.
Петролейный эфир с диапазоном температур кипения 40-60°С.
Натрий сернокислый безводный. При необходимости реактив промывают н-гептаном для удаления липофильных примесей.
Натрий углекислый, раствор массовой концентрацией 50 г/дм3.
Натрий хлорноватистокислый (гипохлорит натрия), раствор массовой концентрацией активного хлора 1,7%.
Серная кислота, раствор массовой долей 50%.
Цикламат натрия, стандартные растворы.
Раствор Карреза N 1: 15 г железистосинеродистого калия (II) (K4[Fe(CN)6]·3H2O) массовой долей не менее 99% растворяют в некотором количестве воды и разбавляют до объема 100 см3.
Раствор Карреза N 2: 30 г сернокислого цинка (ZnSO4·7H2O) массовой долей не менее 99,5% растворяют в некотором количестве воды и разбавляют до объема 100 см3.
Подвижная фаза для ВЭЖХ. Смешивают 80 объемных частей метанола (4.1) с 20 объемными частями воды, полученный раствор фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм, после чего раствор дегазируют с помощью ультразвуковой бани в течение 5 мин.
Раствор для кондиционирования (промывки) хроматографической колонки: раствор этилендиаминтетрауксусной кислоты массовой концентрацией 10 г/дм3
Порошкообразная целлюлоза массовой долей не менее 99,9%, промытая кислотой.
