Продукция соковая. Определение водорастворимых витаминов: тиамина (B1), рибофлавина (В2), пиридоксина (B6) и никотинамида (PP) методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии.
ГОСТ 32903-2014
Настоящий стандарт распространяется на соковую продукцию из фруктов и овощей, обогащенную водорастворимыми витаминами В1, В2, В6, РР, и устанавливает следующие методы обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ОФ-ВЭЖХ) для определения массовой концентрации или массовой доли (далее - содержания) водорастворимых витаминов в ней:
- со спектрофотометрическим детектированием для определения содержания тиамина (В1), пиридоксина (В6) и никотинамида (ниацинамида, РР) - метод А. Диапазоны измерения содержания тиамина (В1) от 1 до 30 мг/дм3 (млн-1), пиридоксина (В6) от 1 до 20 мг/дм3 (млн-1), никотинамида (РР) от 6 до 200 мг/дм3 (млн-1);
- с постколоночной дериватизацией и флюориметрическим детектированием для определения массовой концентрации (массовой доли) тиамина (В1) - метод Б. Диапазон измерения содержания тиамина (В1) от 1 до 30 мг/дм3 (млн-1);
- с постколоночной дериватизацией и флюориметрическим детектированием для определения содержания рибофлавина (В2) и пиридоксина (В6) - метод В. Диапазоны измерения содержания витамина В2 от 1 до 30 мг/дм3 (млн-1), витамина В6 от 1 до 20 мг/дм3 (млн-1).
Методы могут применяться в том числе для поливитаминных и витаминно-минеральных премиксов, применяемых при обогащении соковой продукции.
Метод определения содержания витаминов В1, В6 и РР с помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии со спектрофотометрическим детектором (метод А)
Метод основан на разделении группы водорастворимых витаминов на твердом носителе С18, привитом на высокочистую силикагелевую основу и дополнительными полярными группами с короткой цепочкой (изопропил) по обращенно-фазовому механизму.
Идентификацию и количественный расчет пиков разделенных витаминов проводят при индивидуальных максимумах светопоглощения в ультрафиолетовой области спектра сопоставлением со временем удерживания пиков в градуировочных растворах.
Параметры идентификации витаминов В1, В6 и РР
| Витамин | Время удерживания, мин | Длина волны λ, нм, при максимуме светопоглощения |
|---|---|---|
|
Тиамин (В1) |
3,7±0,2 |
245±2 |
|
Пиридоксин (В6) |
5,7±0,3 |
290±2 |
|
Никотинамид (РР) |
7,0±0,4 |
261±2 |
Метод определения содержания витамина B1 с помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии с постколоночной дериватизацией и флюориметрическим детектором (метод Б)
Идентификацию и количественный расчет массовой концентрации (массовой доли) водорастворимого витамина В1 проводят при максимумах длины волны излучения, индивидуального для данного витамина.
Параметры идентификации витамина В1
| Наименование витамина |
Ориентировочное время удерживания, мин |
Длина волны λ, нм, при максимуме светоиспускания |
Длина волны возбуждения λex, нм |
Длина волны излучения λem, нм |
|---|---|---|---|---|
|
Тиамин (В1) |
5,05±0,25 |
435±2 |
375±2 |
435±2 |
Метод определения содержания витаминов В2 и В6 с помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии с флюориметрическим детектором (метод В)
Детектирование, идентификацию и количественный расчет массовой концентрации (массовой доли) водорастворимых витаминов В2 и В6 проводят при максимуме длины волны излучения, индивидуальном для каждого витамина.
Параметры идентификации витаминов В2 и В6
| Наименование витамина |
Ориентировочное время удерживания, мин |
Длина волны λ, нм, при максимуме светоиспускания |
Длина волны возбуждения λex, нм |
Длина волны излучения λem, нм |
|---|---|---|---|---|
|
Рибофлавин (В2) |
24,00±1,20 |
521±2 |
450±2 |
521±2 |
|
Пиридоксин (В6) |
5,00±0,25 |
395±2 |
290±2 |
395±2 |
Метод определения содержания витаминов В1, В6 и РР с помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии со спектрофотометрическим детектором (метод А)
Хроматограф жидкостной с насосом высокого давления, спектрофотометрическим детектором, позволяющим проводить измерения оптической плотности с программируемой длиной волны в диапазоне 190-600 нм или диодноматричным детектором, позволяющим проводить измерения оптической плотности на нескольких длинах волн в диапазоне от 190 до 800 нм.
Колонка хроматографическая для ВЭЖХ длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная обращенной фазой - октадецилсиликагелем С18 с размером частиц 1,8-5,0 мкм, содержащим на концах привитые гидрофильные группы, обеспечивающая эффективность разделения в отношении витаминов.
Компьютер с установленным программным обеспечением для управления хроматографом и обработки результатов измерений.
рН-метр с погрешностью измерений не более 0,05 ед. рН, комбинированным стеклянным электродом по ГОСТ 9245.
Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 специального (I) класса точности с наибольшим пределом взвешивания 150 г, пределом допускаемой абсолютной погрешности ±0,0005 г.
Дозаторы пипеточные одноканальные переменной вместимости от 100 до 1000 мм3 с допустимой относительной погрешностью дозирования ±2% по воде с соответствующими наконечниками по ГОСТ 28311.
Пипетки градуированные 1-2-2-2, 1-2-2-5, 1-2-2-10 и 1-2-2-25 по ГОСТ 29227.
Колбы мерные 2а-50-2, 2а-100-2, 2а-200-2, 2а-250-2 и 2а-1000-2 по ГОСТ 1770.
Цилиндры мерные 1-100-2 и 1-500-2 по ГОСТ 1770.
Стаканы В-1-100, В-1-200 и Н-1-2000 по ГОСТ 25336.
Стаканчики для взвешивания (бюксы) по ГОСТ 25336.
Фильтры мембранные с диаметром пор 0,20 и 0,45 мкм для фильтрования подвижной фазы и проб.
Установка лабораторная для вакуумной фильтрации жидкостей с мининасосом.
Флаконы стеклянные для проб вместимостью 4 см3 со вставками, с завинчивающимися крышками и тефлоновыми прокладками.
Шприц медицинский вместимостью 5 см3.
Микрошприцы с ценой деления 1 мм3 и пределом СКО случайной составляющей погрешности не более 2%.
Центрифуга настольная с относительным центробежным ускорением ротора не менее 1000 g, снабженная адаптерами для пробирок вместимостью 15 см3.
Пробирки полимерные центрифужные с завинчивающейся крышкой вместимостью 15 см3.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
Тиамин гидрохлорид C12H17N4S с массовой долей основного вещества не менее 99%.
Пиридоксин гидрохлорид C8H11NO3 с массовой долей основного вещества не менее 99,5%.
Никотинамид C6H6N2O, с содержанием основного вещества не менее 99,5%.
Калия гидроксид по ГОСТ 24363, ч.д.а.
Ацетонитрил для градиентной ВЭЖХ с массовой долей основного вещества не менее 99,9%.
Натрий фосфорнокислый однозамещенный (дигидрофосфат) по ГОСТ 245, ч.д.а.
Калий фосфорнокислый однозамещенный (дигидрофосфат) KH2PO4 по ГОСТ 4198, ч.д.а.
Кислота ортофосфорная по ГОСТ 6552 с массовой долей основного вещества не менее 98%, ч.д.а.
Вода для лабораторного анализа по ГОСТ ISO 3696, не ниже 2-й степени чистоты.
Метод определения содержания витамина B1 с помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии с постколоночной дериватизацией и флюориметрическим детектором (метод Б)
Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы для метода А со следующим дополнением.
Хроматограф жидкостной с насосом высокого давления, многоволновым флюориметрическим детектором, позволяющим проводить измерения в диапазоне длин волн возбуждения-эмиссии 200-900 нм.
Система постколоночной дериватизации, интегрированная в систему высокоэффективной жидкостной хроматографии, состоящая из:
- насоса для подачи дериватизирующего реагента;
- реакционного модуля для постколоночной дериватизации;
- температурного контроллера.
Калий железосинеродистый K3Fe(CN)6 по ГОСТ 4206, х.ч.
Метод определения содержания витаминов В2 и В6 с помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии с флюориметрическим детектором (метод В)
Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы для метода А со следующим дополнением.
Хроматограф жидкостной с насосом высокого давления, многоволновым флюориметрическим детектором, позволяющим проводить измерения в диапазоне длин волн возбуждения-эмиссии 200-900 нм.
Рибофлавин гидрохлорид C17H20N4O6 с содержанием основного вещества не менее 99,5%.
