Продукты пищевые. Методы определения массовой доли бенз(а)пирена.
ГОСТ Р 51650-2000
Настоящий стандарт распространяется на продовольственное сырье, пищевые продукты, пищевые и вкусовые добавки и устанавливает методы определения массовой доли бенз(а)пирена с применением спектрофлуориметрии при низкой и комнатной температуре и высокоэффективной жидкостной хроматографии.
1. Метод низкотемпературной спектрофлуориметрии
Сущность метода заключается в экстракции углеводородов, в том числе бенз(а)пирена, гексаном из продукта, предварительно обработанного спиртовым раствором едкого калия, выделении фракции полициклических углеводородов тонкослойной хроматографией на окиси алюминия и количественном определении в полученной фракции бенз(а)пирена методом низкотемпературной спектрофлуориметрии.
Диапазон определяемых величин массовой доли бенз(а)пирена в анализируемых продуктах - 0,0002-0,005 мг/кг или 0,2·10-7 - 5,0·10-7%. Оптимальный диапазон определения массовых концентраций бенз(а)пирена в растворе составляет 0,01-0,05 мкг/см3.
2. Методы высокоэффективной жидкостной хроматографии и спектрофлуориметрии при комнатной температуре
Сущность метода заключается в экстракции углеводородов, в том числе бенз(а)пирена, гексаном из продукта, предварительно обработанного спиртовым раствором едкого калия, выделении фракции полициклических ароматических углеводородов, содержащей бенз(а)пирен, очистке полученной фракции от мешающих примесей на колонке с сефадексом и в тонком слое ацетилированной целлюлозы с последующим количественным определением выделенного бенз(а)пирена высокоэффективной жидкостной хроматографией или спектрофлуориметрией при комнатной температуре.
Диапазон определяемых величин массовой доли бенз(а)пирена в анализируемых продуктах при использовании метода высокоэффективной жидкостной хроматографии и метода спектрофлуориметрии при комнатной температуре 0,0001-0,002 мг/кг или 0,1·10-7 - 2,0·10-7%. Оптимальный диапазон определяемых массовых концентраций бенз(а)пирена в растворе при использовании метода высокоэффективной жидкостной хроматографии составляет 0,01-0,02 мкг/см3, при использовании метода спектрофлуориметрии - 0,02-0,2 мкг/см3.
1. Метод низкотемпературной спектрофлуориметрии
Спектрофотометр флуоресцентный с криогенной приставкой для выполнения измерений при температуре жидкого азота (-196) °С и спектральным диапазоном длин волн 360-420 нм.
Осветитель ультрафиолетовый типа "Хроматоскоп" со спектральным диапазоном 250-700 нм и лампой типа БУВ-15 в качестве источника УФ-излучения.
Шкаф сушильный лабораторный, обеспечивающий температуру (250±4) °С.
Весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104-2001.
Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 500 г по ГОСТ 24104.
Испаритель ротационный ИР-1М.
Баня водяная.
Электроплитка бытовая с закрытой спиралью и регулятором нагревания по ГОСТ 14919.
Сосуд Дьюара для жидкого азота любой вместимости.
Ванны для хроматографирования (фотокюветы эмалированные).
Пластины стеклянные размером 15х30 и 20х40 см.
Колбы К-1-250-29/32 ТХС, К-1-100-29/32 ТХС, К-1-500-29/32 ТХС или П-1-500-29/32 ТХС по ГОСТ 25336.
Холодильники ХПТ-1-300-14/23 ХС или ХПТ-1-400-14/23 ХС по ГОСТ 25336.
Холодильники ХПТ-2-400-29/32 ХС и ХПТ-1-300-29/32 или ХПТ-400-29/32 ХС по ГОСТ 25336.
Дефлегматор 250-19/26-29/32 ТС или дефлегматор 300-19/26-29/32 ТС по ГОСТ 25336.
Пробирки стеклянные П2-10-180 ХС по ГОСТ 25336.
Алонж АИО-14/23-50 ТС по ГОСТ 25336.
Насадка П-1-19/26-14/23 ТС или Н2-19/23 по ГОСТ 25336.
Насос водоструйный лабораторный по ГОСТ 25336.
Пипетки вместимостью 1, 2, 5, 10 см3 по ГОСТ 29228 и ГОСТ 29229.
Воронка ВФО-32-ПОР 100-14/23 ХС или ВФО-32-ПОР 160-14/23 ХС по ГОСТ 25336.
Пробирки мерные П-2-15-14/23 ХС по ГОСТ 1770.
Воронка делительная ВД-1-500 или ВД-3-500 по ГОСТ 25336.
Цилиндры мерные 1-100, 1-250 или 3-100, 3-250 по ГОСТ 25336.
Стаканчики для взвешивания (бюксы) СВ-14/8, или СВ-19/9, или СВ-24/10, или СВ-34/12 по ГОСТ 25336.
Термометр с пределами измерения температуры 0-250 °С с ценой деления 1 °С по ГОСТ 29224.
Линейка измерительная с ценой деления 0,1 см по ГОСТ 427.
Колбы мерные 2-100-2 по ГОСТ 25336.
Капилляры стеклянные, палочки стеклянные.
н-Октан, ч..
н-Гексан, ч..
Спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300 или спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652.
Эфир петролейный фракция 40-70 °С.
Хлороформ по ГОСТ 20015.
Бензол по ГОСТ 5955.
Алюминия окись для хроматографии 2 степени активности.
Калия гидроокись по ГОСТ 24363.
Бенз(а)пирен, содержание основного вещества не менее 98%.
1,12-Бензперилен, содержание основного вещества не менее 98%.
Азот жидкий по ГОСТ 9293.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
2. Методы высокоэффективной жидкостной хроматографии и спектрофлуориметрии при комнатной температуре
Флуоресцентный спектрометр со спектральным диапазоном длин волн 300-460 нм с кюветами вместимостью 0,4 см3.
Хроматограф жидкостный с флуориметрическим детектором со спектральным диапазоном длин волн 300-420 нм.
Колонка хроматографическая стальная или стеклянная длиной 150 мм и диаметром 6 мм, заполненная сорбентом с привитой обращенной фазой (например, Supelcosil LC-PAH).
Весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.
Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 500 г по ГОСТ 24104.
Испаритель ротационный ИР-1М.
Насос водоструйный лабораторный по ГОСТ 25336.
Баня водяная.
Мешалка магнитная типа ММ-3М с электроподогревом.
Осветитель ультрафиолетовый типа "Хроматоскоп" со спектральным диапазоном 250-700 нм и лампой типа БУВ-15 в качестве источника УФ-излучения.
Камера хроматографическая стеклянная 40х40х40 см.
Пластинки стеклянные для тонкослойной хроматографии 5х20 и 20х20 см.
Колонка стеклянная хроматографическая длиной 500 мм и диаметром 20 мм с оттянутым внизу концом и резервуаром вместимостью 50-60 см3 ПШ 14/23.
Холодильник ХПТ-2-400-29/32 ХС или ХШ-1-400-29/32 ХС по ГОСТ 25336.
Алонж типа АИО-14/23-50 ТС или АИО-14/23-14/23-65 ТС по ГОСТ 25336.
Линейка измерительная с ценой деления 0,1 см по ГОСТ 427.
Дефлегматор 250-19/26-29/32 ТС или 300-19/26-29/32 по ГОСТ 25336.
Насадка П-1-19/26-14/23-14/23 ТС или Н-2-19/26-14/23 ТС по ГОСТ 25336.
Воронка делительная ВД-1-500 или ВД-3-500 по ГОСТ 25336.
Воронка ВФО-32-ПОР 100-14/23 ХС или ВФО-32-ПОР 160-14/23 ХС по ГОСТ 25336.
Цилиндры мерные 1-100, 1-250 или 3-100, 3-250 по ГОСТ 25336.
Стакан химический В-1-100 или В-1-150 по ГОСТ 25336.
Колба 1-500 по ГОСТ 25336.
Колба Гр 50-14/23 по ГОСТ 25336.
Колбы К-1-100-29/32 ТХС, К-1-25Р-29/32 ТХС, К-1-500-29/32 ТХС или П-1-500-29/32 ТХС по ГОСТ 25336.
Колбы Кн-1000-29/32 ТХС по ГОСТ 25336, Кн-250-34 ТХС по ГОСТ 25336.
Колбы мерные 2-100-2 по ГОСТ 25336.
Воронка Бюхнера 1 или 2, или 3 по ГОСТ 9147.
Стаканчики для взвешивания (бюксы) СВ-14/8 или СВ-19/9, или СВ-24/10, или СВ-34/12 по ГОСТ 25336.
Микрошприцы типов МШ-10, стеклянные капилляры.
Пипетки 1-1-1, 1-1-2, 2-1-5, 8-2-0,2 по ГОСТ 29228 или ГОСТ 29229.
Бумага индикаторная универсальная.
Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
Скальпель или тонкий шпатель.
н-Гексан, ч..
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652 или спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300.
Бензол по ГОСТ 5955.
Толуол по ГОСТ 5789.
Кислота серная по ГОСТ 4204.
Ацетон по ГОСТ 2603, ч. или ос.ч.
Ангидрид уксусный по ГОСТ 5815, ч.
Диметилформамид по ГОСТ 20289, ч.д.а.
Ацетонитрил.
Калия гидроокись по ГОСТ 24363.
Целлюлоза микрокристаллическая порошковая.
Бенз(а)пирен, содержание основного вещества не менее 98%.
Бенз(b)хризен, содержание основного вещества не менее 98%.
Сефадекс LH-20.
Силикагель марки АСКГ.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
