Продукты пищевые. Определение нитрата и (или) нитрита. Часть 2. Определение нитрата в овощах и продуктах их переработки методами высокоэффективной жидкостной хроматографии и ионной хроматографии.
ГОСТ EN 12014-2-2014
Настоящий стандарт устанавливает метод определения нитрата в овощах и продуктах их переработки с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и ионной хроматографии (ИХ). Диапазон измерений содержания нитрата данным методом - от 50 до 3000 мг/кг.
Метод основан на экстрагировании нитрата из пробы горячей водой, очистке экстракта от мешающих компонентов матрицы путем обработки растворами Карреза или методом твердофазной экстракции и последующем анализе методом обращенно-фазовой ВЭЖХ с применением спектрофотометрического детектирования в ультрафиолетовой области или методом ИХ с применением кондуктометрического детектирования.
Оборудование для ионной хроматографии, включающее в себя перечисленные ниже позиции:
- Система для ионной хроматографии, состоящая из резервуара для подвижной фазы, насоса, инжектора, кондуктометрического или спектрофотометрического детектора, пригодного для измерений в ультрафиолетовой области спектра, и системы обработки данных, например интегратора с печатающим устройством.
- Колонка аналитическая, заполненная анионообменным сорбентом малой емкости, например, Dionex Ion Рас AS 4А или Dionex Ion Рас AS 4, снабженная мембранным устройством подавления фоновой электропроводности и защитной колонкой, обеспечивающая отделение пика нитрат-иона от других пиков на уровне базовой линии (величина фактора разделения res =1,3)
Оборудование для ВЭЖХ, включающее:
- Хроматограф жидкостный, состоящий из резервуара для подвижной фазы, насоса высокого давления, инжектора, спектрофотометрического детектора, пригодного для измерений в ультрафиолетовой области спектра и системы обработки данных, например, интегратора с печатающим устройством.
- Колонка аналитическая, заполненная сорбентом средней полярности с привитыми аминопропильными группами диаметром частиц от 5 мкм до 10 мкм, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, снабженная защитной колонкой, заполненной тем же сорбентом, например Lichrosorb NH2.
Измельчитель лабораторный.
Гомогенизатор.
Фильтры бумажные.
Фильтры мембранные для водных растворов диаметром пор 0,45 мкм.
Держатель для мембранных фильтров с подходящим шприцом.
Колонки для твердофазной экстракции, заполненные обращенно-фазовым сорбентом типа RP C18.
Метанол для ВЭЖХ.
Ацетонитрил для ВЭЖХ.
Кислота серная, раствор молярной концентрации c(H2SO4)=0,0125 моль/дм3.
Раствор Карреза I: 150 г гексацианоферрата (II) калия [K4[Fe(CN)6·ЗН2O] растворяют в некотором количестве воды, объем раствора доводят до 1000 см3 водой, раствор тщательно перемешивают.
Раствор Карреза II: 200 г уксуснокислого цинка (Zn(CH3(COO)2·2Н2O) растворяют в некотором количестве воды, к полученному раствору добавляют 30 см3 уксусной кислоты, объем раствора доводят до 1000 см3 водой.
Нитрат-ион, основной раствор массовой концентрации ρ(NO3)=1 мг/см3. Для приготовления раствора нитрат калия массой 1,6307 г, измеренной с точностью до 0,1 мг, растворяют в некотором количестве воды в мерной колбе вместимостью 1000 см3. В колбу добавляют 15 см3 серной кислоты массовой долей 96% и плотностью 1,84 г/см3, полученный раствор перемешивают, после объем содержимого колбы доводят до метки водой, полученный раствор снова перемешивают.
Нитрат-ион, градуировочный раствор I массовой концентрациир ρ(NO3)=50 мкг/см3. Для приготовления раствора пипеткой отмеряют 5 см3 основного раствора и помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, объем содержимого колбы доводят до метки водой, полученный раствор перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр.
Нитрат-ион, градуировочный раствор II массовой концентрации ρ(NO3)=5 мкг/см3. Для приготовления раствора пипеткой отмеряют 5 см3 основного раствора и помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см3, объем содержимого колбы доводят до метки водой, полученный раствор перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр.
Натрий углекислый, натрий двууглекислый, смешанный раствор. Для приготовления раствора порции углекислого натрия (Na2CO3) массой 29,676 г и двууглекислого натрия (NaHCO3) массой 18,482 г, измеренной с точностью до 1 мг, растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 1000 см3, объем раствора в колбе доводят водой до метки.
Подвижная фаза для ИХ. Для приготовления подвижной фазы для ИХ пипеткой отмеряют 50 см3 смешанного раствора карбоната натрия и бикарбоната натрия и помещают в мерную колбу вместимостью 5 дм3, объем содержимого колбы доводят до метки водой, полученный раствор перемешивают.
Подвижная фаза для ВЭЖХ. Для приготовления подвижной фазы для ВЭЖХ 10 г двухзамещенного фосфата калия (K2НРO4) помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см3. В колбу вносят 50 см3 ацетонитрила, объем содержимого колбы доводят до метки водой, содержимое колбы перемешивают. Значение рН полученного раствора доводят до 3,0 добавлением раствора ортофосфорной кислоты массовой долей 85%. Полученный раствор фильтруют через мембранный фильтр.
