Продукты пищевые. Определение содержания витамина А методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Часть 2. Измерение содержания бета-каротина.
ГОСТ EN 12823-2-2014
Настоящий стандарт устанавливает метод определения полного β-каротина в пищевых продуктах при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ).
Сумму изомеров β-каротина в испытуемом растворе пробы определяют методом ВЭЖХ с помощью спектрофотометрического детектора в видимом диапазоне. Экстракт, полученный после омыления, описанного в EN 12823-1, может использоваться для количественного анализа.
Спектрофотометр УФ и видимой области спектра, способный измерять оптическую плотность на указанных длинах волн, с соответствующими кварцевыми кюветами, например с толщиной слоя 1 см.
Испаритель ротационный с водяной баней и вакуумным насосом.
Система ВЭЖХ, состоящая из насоса, устройства для ввода проб, спектрофотометрического детектора для ультрафиолетовой и видимой области и системы регистрации и обработки, например интегратора.
Аналитическая колонка для обращенно-фазовой хроматографии, например, С18, с размером частиц неподвижной фазы 5 мкм, диаметром от 4,0 до 4,6 мм, длиной 250 мм.
Могут использоваться другие типы колонок и размеры частиц наполнителя (адсорбента), отличных от указанных в настоящем стандарте. Для получения аналогичных результатов может потребоваться корректировка условий проведения хроматографических измерений для таких колонок. Показателем эффективности для соответствующих аналитических колонок является степень разделения для пиков полного транс-α-каротина и полного транс-β-каротина, которая должна быть более 1.
Подходящими аналитическими колонками с обращенной фазой являются, например, Vydac®201TP54, Vydac®218TP54, Eurospher®100-C18 , Ultraspe®ODS, Spherisorb®ODS2, Zorbax®ODS и LiChrospher®RP18. Колонки могут использоваться с последовательным включением. Также рекомендуется использовать защитную колонку для продления срока службы аналитической колонки.
Мембранные фильтры большого и малого размера для фильтрации подвижных фаз ВЭЖХ и растворов проб, например с размером пор 0,45 мкм.
Ультразвуковая баня.
Фильтры для разделения фаз (применяются по выбору пользователя стандарта).
Метанол.
Этанол абсолютный, объемной долей 100%.
Этанол, объемной долей 96%.
Сульфат натрия (сернокислый натрий) безводный.
Растворы гидроксида калия (KOH) для омыления с соответствующими массовыми концентрациями, например: KOH = 50 г/100 см3 или 60 г/100 см3 или спиртовые растворы, например: 28 г KOH в 100 см3 смеси этанол/вода (в объемном соотношении 9:1).
Антиоксиданты: аскорбиновая кислота (АК), аскорбат натрия, сульфид натрия (Na2S), бутилгидрокситолуол, пирогаллол или гидрохинон.
Растворители и экстрагенты: ацетонитрил, диэтиловый эфир (без пероксидов), диизопропиловый эфир, петролейный эфир (кипящий при температуре от 40°С до 60°С), н-гексан, дихлорметан, тетрагидрофуран, толуол или их смеси.
Раствор ацетата аммония в метаноле, например, c(CH3CO2NH4)=0,05 моль/дм3.
Триэтиламин.
Растворители, выполняющие роль подвижной фазы в ВЭЖХ, например, смесь ацетонитрил - метанольный раствор ацетата аммония - дихлорметан (75:20:5 в объемном соотношении), содержащий 0,1% (по массе) бутилгидрокситолуола и 0,05% (по массе) триэтиламина. Информация о подвижных фазах для альтернативных систем ВЭЖХ приведена в приложении С.
β-Каротин, М (C40H56) = 536,85 г/моль, с массовой долей β-каротина не менее 95%.
α-Каротин, М (C40H56) = 536,85 г/моль, для качественного анализа.
Ликопин, М (C40H56) = 536,85 г/моль, для качественного анализа.
