Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.
ГОСТ 34151-2017
Настоящий стандарт устанавливает метод определения витамина C в пищевых продуктах с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
Содержание витамина C определяется в виде суммы L(+)-аскорбиновой и L(+)-дегидроаскорбиновой кислот.
Метод основан на экстракции витамина C из пробы раствором метафосфорной кислоты, с последующим восстановлением L(+)-дегидроаскорбиновой кислоты до L(+)-аскорбиновой кислоты и определением общего содержания L(+)-аскорбиновой кислоты с применением высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) со спектрофотометрическим детектированием при длине волны 265 нм.
Спектрофотометр с рабочим спектральным диапазоном в ультрафиолетовой области, пригодный для измерения оптической плотности при требуемых длинах волн, с комплектом кювет.
Хроматограф жидкостный. ВЭЖХ-система, состоящая из насоса, устройства ввода пробы, спектрофотометрического детектора, пригодного для измерения оптической плотности при длине волны 265 нм и компьютерной системы сбора и обработки данных.
Колонка для ВЭЖХ разделения. Колонка с внутренним диаметром 4,0 мм, длиной 250 мм, заполненная сорбентом на основе силикагеля с привитыми группами C18 размером частиц сорбента 5 мкм.
Устройство для фильтрации. Мембранный фильтр с размером пор, например, 0,2 или 0,45 мкм. Фильтрование подвижной фазы и раствора пробы перед использованием или вводом в хроматограф продлевает срок службы колонки.
Весы неавтоматического действия специального класса точности по ГОСТ OIML R 76-1 пределом допускаемой абсолютной погрешности ±0,001 г.
Иономер (рН-метр) любого типа, в комплекте с комбинированным стеклянным электродом и пределом абсолютной погрешности измерения ±0,1 ед. рН.
Пипетки градуированные различной вместимости по ГОСТ 29227.
Мерные колбы, пробирки и цилиндры различной вместимости по ГОСТ 1770.
Мешалка магнитная.
Стаканы исполнения 1 и колбы конические Кн различной вместимости по ГОСТ 25336.
Мельница лабораторная или гомогенизатор любого типа, для измельчения проб.
Шприцы однократного применения по ГОСТ ISO 7886-1.
Виалы стеклянные из темного стекла с крышкой и септой из полимерного материала подходящей вместимости.
Кислота метафосфорная (HPO3)n.
Натрий фосфат трехзамещенный 12-водный Na3PO4·12H2O с массовой долей основного вещества не менее 98,0%.
Калий фосфат однозамещенный (дигидрофосфат) KH2PO4 с массовой долей не менее 99,0%.
L-цистеин C3H7NO2S с массовой долей не менее 99,0%.
N-цетил-N,N,N-триметиламмонийбромид (цетримид) C19H42BrN с массовой долей не менее 99,0%.
Метанол (для ВЭЖХ) с массовой долей не менее 99,0%.
Кислота метафосфорная, раствор массовой концентрации ρ[(HPO3)n]=200 г/дм3.
Кислота метафосфорная, раствор массовой концентрации ρ[(HPO3)n]=20 г/дм3
Натрий фосфорнокислый трехзамещенный, раствор массовой концентрации ρ(Na3PO4·12H2O)=200 г/дм3
L-цистеин, раствор массовой концентрации ρ(C3H7NO2S)=40 г/дм3
Фаза подвижная для ВЭЖХ.
13,6 г дигидрофосфата калия растворяют в стакане в 900 см3 воды. Раствор фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм (раствор A).
1,82 г N-цетил-N,N,N-триметиламмонийбромида растворяют в стакане в 100 см3 метанола. Полученный раствор фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм (раствор B).
Смешивают 900 см3 раствора A и 100 см3 раствора B. Полученную подвижную фазу для ВЭЖХ при необходимости перед употреблением дегазируют.
Крахмал (применяют по выбору пользователя), раствор массовой концентрации 1 г/100 см3.
Йод (применяют по выбору пользователя), раствор молярной концентрации с(l2)=0,05 моль/дм3.
4.2.14 Кислота серная, раствор молярной концентрации с(H2SO4)=0,1 моль/дм3.
Стандартные вещества
Кислота аскорбиновая (или L(+)-аскорбиновая) с массовой долей w(C6H8O6) не менее 99,7%
(R)-5-[(S)-1,2-дигидроксиэтил]-3,4-дигидрокси-5-Н-фуран-2-он.
Кислота эриторбовая (изоаскорбиновая), D(-)-аскорбиновая с массовой долей w(C6H8O6) не менее 99,0%
(R)-5-[(R)-1,2-дигидроксиэтил]-3,4-дигидрокси-5-Н-фуран-2-он.
