Clarity QSP

Clarity QSP состоит из двух компонентов: загрузочного буферного раствора и полимерного сорбента. Специально разработанный буферный раствор и сорбент синергически воздействуют на сырую синтетическую смесь, обеспечивая более чем 90-процентное извлечение и очистку менее чем за 20 минут. QSP-смола pH-стабильна и очищает цепочки олигонуклеотидов длиной от 10 до 100 оснований. Степень очистки синтезированных цепочек ДНК составляет 80% и более. Очистка РНК, гораздо более сложная процедура, составляет 75%.

Обычные картриджи с обращённой фазой для удержания ДНК/РНК с тритильной защитой требуют использования токсичных ион-парных реагентов. Ион-парные реагенты часто бывает очень трудно удалить из очищенных олигонуклеотидов, особенно при работе в естественных условиях. ДНК и РНК буферные растворы Clarity QSP состоят из биологически совместимых агентов и не содержат токсичные и назойливые ион-парные реагенты.

Почти все коммерческие картриджи с обращённой фазой не предусматривают прямой или неразбавленной загрузки щелочного коктейля, тем самым ограничивается их полезность для серийной высокопроизводительной очистки. Основная цель разработки Clarity QSP состояла в том, чтобы обеспечить возможность загрузки в картридж синтезированных олигонуклеотидов из концентрированного гидроксида аммония для ДНК или триэтиламина для РНК. С Clarity QSP непосредственная загрузка стала реальностью, это экономит драгоценное время и позволяет избежать длительного этапа сушки.

Процедура очистки включает короткую подготовительную стадию и 3 простых шага для отделения целевого олигонуклеотида от примесей и неудачных цепочек.
Предварительная обработка образца. Смешиваются равные количества загрузочного буферного раствора и расщеплённой/незащищённой пробой.
Шаг 1. Загрузка сырой смеси олигонуклеотидов. После краткого кондиционирования сорбента метанолом и водой загружается сырая смесь олигонуклеотидов. Буферный раствор обеспечивает селективное удерживание защищённых тритильной группой олигонуклеотидов полной длины, в то время как не защищённые тритильной группой усечённые олигонуклеотиды и примеси проходят через сорбент. Промывка после этого шага не требуется.
Шаг 2. Снятие тритильной защиты. Для отделения от нуклеотида тритильной группы добавляется дихлорацетатная кислота. Очистка защищённых тритильной группой олигонуклеотидов вне зависимости от механизма приводит к разрушению некоторого количества пуриновых оснований. При разработке Clarity QSP значительные усилия были направлены на то, чтобы минимизировать степень повреждения олигонуклеотидов при снятии тритильной защиты. Очистка по методике Clarity QSP разрушает менее 2% пуриновых оснований.
Шаг 3. Элюирование. Добавляется pH буферный раствор. Подбор элюирующего буферного раствора осуществляется в зависимости от последующего использования синтезированного олигонуклеотида.

Буферный раствор	pH	Применение	Высушивание	Восстановление
15 мМ Na2CO3 / 20% ацетонитрил	7.5 - 8	исследования в естественных условиях	да	водой
20 мМ Na2HCO3 / 20% ацетонитрил	7.5	исследования в естественных условиях	да	водой
10 мМ Tris pH 8 / 20% ацетонитрил	8	исследования в естественных условиях	да	водой
20 мМ NH4HCO3 / 20% ацетонитрил	7.5	МС, ВЭЖХ, ионизация электроспрея, МАЛДИ, ЯМР	возможно	водой
15 мМ NH4CO3 / 20% ацетонитрил	7.5 - 8	МС, ВЭЖХ, ионизация электроспрея, МАЛДИ, ЯМР	возможно	водой
20 мМ NH4CH3CO2 pH 8 / 20% ацетонитрил	7	МС, ВЭЖХ, ионизация электроспрея, МАЛДИ, ЯМР	возможно	водой

Информация для заказа