Подготовка образцов методом ТФЭ
Подготовка образцов методом ТФЭ может осуществляться двумя сбособами.1. Удерживающая ТФЭ
Исследуемое вещество и некоторые мешающие компоненты образца задерживаются на сорбенте при прохождении образца через колонку (картридж для ТФЭ). Примеси, взаимодействующие с сорбентом, удаляются при пропускании через картридж слабого элюента. Затем с помощью сильного элюента, добавляемого малыми порциями, исследуемое вещество также снимается с сорбента. Очищенное, сконцентрированное вещество теперь готово для проведения количественного анализа методом ВЭЖХ или другим аналитическим методом.
2. Неудерживающая ТФЭ
Исследуемое вещество не взаимодействует с сорбентом, находящимся в патроне, в то время как все мешающие компоненты осаждаются на сорбенте. Полученный элюат затем можно сконцентрировать при помощи упаривания или отдувки растворителя и исследовать любыми доступными аналитическими методами.
В ТФЭ используются три основных режима разделения: обращённо-фазовый, нормально-фазовый, ионный обмен.
Обращенно-фазовый режим разделения - экстракция неполярных соединений из водных образцов за счёт Ван дер Ваальсовых взаимодействий.
Нормально-фазовый режим разделения - экстракция полярных соединений из неполярных органических растворителей за счёт водородных связей, диполь - дипольных и π-π взаимодействий.
Ионообменный режим разделения - экстракция заряженных соединений из органических или водных растворов с низкой ионной силой за счёт кулоновских взаимодействий.
| Метод ТФЭ | Обращенно-фазовый | Нормально-фазовый | Сильный ионный обмен | |||
| Сорбент | SDB, C18, C8, PH, CN | Silica, Florisil, NH2, CN | SAX (анионный обмен), SCX (катионный обмен) | |||
| Свойства исследуемого вещества | Слабо полярные (или неполярный), гидрофобные, электрически нейтральные соединения. | Фармацев- тические препараты. Пестициды, гербициды. |
Умеренно или сильно полярные, электрически нейтральные соединения. | Пестициды. | Электрически заряженные вещества. | Анионный обмен: анализ веществ, обладающих кислотными свойствами. Катионный обмен: анализ лекарственных препаратов. |
| Образец/ матрица |
Водорастворимые вещества в буферном растворе. | Биологические жидкости. Вода. | Неполярные или умеренно полярные органические растворители. | Гексан, хлороформ, сложные эфиры, толуол или метиленхлорид. | Водные буферные растворы низкой ионной силы (с концентрациями не более 30 ммоль) и точно подобранным значением рН | Биологические жидкости плюс буферный раствор. |
| Стадия кондицио- нирования |
1. Сольватация полярными органическими растворителями 2. Уравновеши- вание добавкой воды или буферного раствора |
1. Метанол 2. Вода или буферный раствор |
1. Сольватация полярными органическими растворителями (проводится не всегда) 2. Уравновеши- вание растворителем равным по элюирующей способности с наносимым раствором образца с учетом матрицы |
1. Метанол (не во всех случаях) 2. Гексан или хлороформ |
1. Кондициони- рование полярным органическим растворителем 2. Уравновеши- вание буферным раствором с низкой ионной силой и точно подобранным рН |
1. Метанол 2. 25 mM Tris-0Ac, pH 7 |
| Стадия промывки | Водный буферный раствор с содержанием от 5 до 50% полярного органического растворителя. | Метанол:вода (1:9) | Неполярные органические растворители с низкой концентрацией (от 1 до 5%) слабо полярных органических растворителей | Гексан с 1% тетрагидро- фарана, этилацетат, ацетон, ацетонитрил или изопропанол. |
Водяной буфер с низкой концентрацией солей с органическим растворителем или без органического растворителя. | Анионный обмен: Буферный раствор pH7:метанол (50:50) Катионный обмен: 1. Буферный раствор pH 6 2. 1M уксусной кислоты 3. Метанол |
| Стадия элюирования | Полярные или неполярные органические растворители с водой или без воды, буферный раствор, сильная кислота или основание | Метанол: ацетонитрил: HCl (4:4:2) |
Неполярные органические растворители с высокой концентрацией (от 5 до 50%) средне и сильно полярных органических растворителей | Гексан с 10% тетрагидро-фарана, этилацетат, ацетон, ацетонитрил или изопропанол. |
|
Анионный обмен: гексан:этилацетат (75:25) + 1% ледяной уксусной кислоты Катионный обмен: метанол + 5% NH3 |
