Clarity Oligo-RP
Колонки Clarity Oligo-RP специально разработаны для обращённо-фазовой очистки олигонуклеотидов с соблюдением баланса между гидрофобностью и полярной селективностью. Частицы сорбента выполнены по композитной TWIN™ технологии. Эта технология даёт лучшую селективность и эффективность при работе с олигонуклеотидами по сравнению с другими имеющимися на рынке гибридными и полимерными сорбентами или сорбентами на основе силикагеля. Колонки Clarity Oligo-RP выпускаются в широком диапазоне размеров с частицами сорбента 3, 5 и 10 мкм.
- Отделение до 90% ошибочных N-1 цепочек от целевого олигонуклеотида.
- Очистка не защищённых тритильной группой ДНК, РНК, тиоатов и модифицированных/меченных олигонуклеотидов.
- Препаративные колонки для загрузки > 5 мкмоль.
- Очистка олигонуклеотидов длиной до 60 оснований.
- Отличные колонки для задач контроля качества методом обращённо-фазовой ВЭЖХ.
Сорбент Oligo-RP специально разработан так, чтобы совместить все возможные способы нуклеотидов взаимодействовать друг с другом. Сорбент обладает гидрофобной, дипольной, п-п и водородной связью донорно-акцепторных участков. Благодаря этой комбинаций взаимодействий и ион-парному реагенту достигается высокий уровень избирательной селективности между нуклеиновыми кислотами. Oligo-RP может распознать даже незначительные изменения в цепочке нуклеотидов, например, разницу в одно основание (N и N-1) или замену одного основания другим.
Разделение ошибочной цепочки длины N-1 и целевой цепочки длины N
1. Цепочка РНК из 20 оснований:
CUGUAAUCUCUUGUCUATT
2. Цепочка РНК из 21 основания:
UCUGUAAUCUCUUGUCUATT
| Колонка: | Clarity Oligo-RP C18 50х4.6 мм 3 мкм |
| Подвижная фаза: | A: 10 мМ гексафторизопропанол; B: метанол |
| Градиент: | c A/B (75:25) до A/B (55:45) за 80 мин |
| Расход: | 1 мл/мин |
| Детектирование: | УФ 260 нм |
Разрешение примесей в цепочке ДНК из 60 оснований
Цепочка ДНК из 60 оснований:
5’-CTC CTG GGC CGT GGC TCT GCG CAC TTC AGG AAA CTG GGC ACT CCT GGG CAG TGG ATC TGC-3’
Номера пиков обозначают длину цепочки присутствующей примеси
| Колонка: | Clarity Oligo-RP C18 50х4.6 мм 3 мкм |
| Подвижная фаза: | A: 50 мМ триэтиламмоний ацетат pH 7.5/5% ацетонитрил; B: метанол |
| Градиент: | с 20% до 25% B за 20 мин; держать 25% В - 5 мин |
| Расход: | 1 мл/мин |
| Детектирование: | УФ 260 нм |
Обращённо-фазовое разделение олигонуклеотидов имеет преимущество перед другими методами разделения, такими как ионный обмен. Фаза Oligo-RP предусматривает высокую нагрузочную способность и обеспечивает высокую степень восстановления и чистоты, устраняя необходимость в дополнительных стадиях очистки, таких как обессоливание. Так как обращенно-фазовая ВЭЖХ обладает чрезвычайно высоким разрешением, колонки Oligo-RP позволяют легко отделить целевой олигонуклеотид от многих примесей, таких как N-1 ошибочные цепочки. Кроме того, с помощью одной колонки можно разделять и ДНК, и РНК, и модифицированные олигонуклеотиды.
Препаративная очистка ДНК
200 мкг (1 мкмоль) образца 20-мерной ДНК были загружены в препаративную колонку Clarity Oligo-RP с внутренним диаметром 10 мм. В результате примеси были удалены из целевой цепочки.
Для проверки качества препаративной очистки был проведён анализ на аналитической колонке. Подтверждена степень очистки 92% при выходе 85%.
| Колонка: | Clarity Oligo-RP C18 3 мкм 50х10 мм (препаративная) 50х4.6 мм (аналитическая) |
| Подвижная фаза: | A: 50 мМ триэтиламмоний ацетат pH 7.5/5% ацетонитрил; B: метанол |
| Градиент: | с A/B (90:10) до A/B (40:60) за 20 мин |
| Расход: | 1 мл/мин |
| Детектирование: | УФ 260 нм |
| Образец: | цепочка ДНК из 20 оснований ACGTCATGTCGAGATCATCG |
Очистка меченных ДНК с различным содержание GC
2. FAM-меченная ДНК (25 оснований) GC: 56%
3. FAM-меченная ДНК (25 оснований) GC: 20%
| Колонка: | Clarity Oligo-RP C18 50х4.6 мм 3 мкм |
| Подвижная фаза: | A: 50 мМ триэтиламмоний ацетат pH 7.5/5% ацетонитрил; B: метанол |
| Градиент: | с A/B (90:10) до A/B (40:60) за 20 мин |
| Расход: | 1 мл/мин |
| Детектирование: | УФ 260 нм |
Информация для заказа
Колонки малого диаметра
| Номер по каталогу Phenomenex |
Зернение, мкм |
Размер колонки, мм (длина х диаметр) |
| 00B-4441-B0 | 3 | 50x2,0 |
| 00D-4441-B0 | 3 | 100x2,0 |
| 00F-4441-B0 | 3 | 150x2,0 |
| 00F-4442-B0 | 5 | 150x2,0 |
Аналитические колонки
| Номер по каталогу Phenomenex |
Зернение, мкм |
Размер колонки, мм (длина х диаметр) |
| 00B-4441-E0 | 3 | 50x4,6 |
| 00D-4441-E0 | 3 | 100х4,6 |
| 00F-4441-E0 | 3 | 150х4,6 |
| 00B-4442-E0 | 5 | 50x4,6 |
| 00F-4442-E0 | 5 | 150x4,6 |
| 00G-4442-E0 | 5 | 250x4,6 |
| 00F-4445-E0 | 10 | 150х4,6 |
Полупрепаративные и препаративные колонки
| Номер по каталогу Phenomenex |
Зернение, мкм |
Размер колонки, мм (длина х диаметр) |
| 00B-4441-N0 | 3 | 50x10 |
| 00B-4442-N0 | 5 | 50x10 |
| 00D-4442-N0 | 5 | 100x10 |
| 00F-4442-N0 | 5 | 150x10 |
| 00G-4442-N0 | 5 | 250х10 |
| 00D-4442-P0-AX | 5 | 100х21.2 |
| 00G-4442-P0-AX | 5 | 250х21.2 |
| 00D-4442-U0-AX | 5 | 100х30 |
| 00F-4445-N0 | 10 | 150x10 |
| 00G-4445-N0 | 10 | 250x10 |
| 00F-4445-P0-AX | 10 | 150х21.2 |
| 00G-4445-P0-AX | 10 | 250х21.2 |
| 00F-4445-U0-AX | 10 | 150х30 |
| 00G-4445-V0-AX | 10 | 250х50 |
Система защиты колонок SecurityGuard
| Номер по каталогу Phenomenex |
Описание | Размер, мм |
Рекомендуется для колонок с внутренним диаметром, мм |
| KJ0-4282 |
Security Guard Kit, включающий |
- | 2-8 |
| AJ0-9281 | держатель картриджа 10 мм ID | - | 9-16 |
| AJ0-8223 | держатель картриджа 21.2 мм ID | - | 18-29 |
| AJ0-8277 | держатель картриджа 30 мм ID | - | 30-49 |
| AJ0-8134 | защитный картридж | 4x2,0 | 2-3 |
| AJ0-8135 | защитный картридж | 4x3,0 | 3.2-8 |
| AJ0-8136 | защитный картридж | 10x10 | 9-16 |
| AJ0-8210 | защитный картридж | 15x21.2 | 18-29 |
| AJ0-8310 | защитный картридж | 15x30 | 30-49 |
